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    豬瘟病毒抗體診斷試劑盒說明書
    更新時(shí)間:2019-04-17 點(diǎn)擊量:2675

    豬瘟病毒抗體(IgG)診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)

    說明書

     

    產(chǎn)品名稱

    通用名稱:豬瘟病毒抗體(IgG)診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)

    英文名稱:Classical Swine Fever Virus Antibody Test Kit (ELISA), CSFV Ab

    包裝規(guī)格

    96×2測試/盒

    預(yù)期用途

    本試劑盒用于定性測定豬血清中豬瘟IgG抗體。用于評估豬場豬瘟疫苗免疫狀況,感染豬的血清學(xué)診斷以及豬瘟的流行病學(xué)調(diào)查。

    檢驗(yàn)原理

    本試劑盒應(yīng)用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)原理,由包被有高純度的豬瘟重組抗原的微孔反應(yīng)板、辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應(yīng)機(jī)理為包被抗原與樣本中的CSFV-IgG結(jié)合,再與酶標(biāo)抗豬IgG抗體形成“包被抗原+CSFV-IgG+酶標(biāo)抗豬IgG抗體”復(fù)合物,加入顯色劑,通過酶催化反應(yīng)顯色。顯深淺與CSFV-IgG的量成正比,當(dāng)顯色超過設(shè)定的臨界值時(shí)結(jié)果判為陽性,表明免疫有效或有自然感染。

    主要組成成份

    1.

    CSFV抗原包被板

    96T×2塊

    包被有CSFV重組抗原

    2.

    標(biāo)記(黃蓋)

    22ml×1瓶

    含辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG抗體

    3.

    樣本稀釋液(透明蓋)

    25ml×1瓶

    主要成份為0.01M PBS緩沖液

    4.

    濃縮洗滌液(20×)(白蓋)

    50ml×1瓶

    PBST緩沖液,用前用去離子水20倍稀釋

    5.

    CSFV-IgG陰性對照血清(綠蓋)

    1.5ml×1瓶

    主要成份為CSFV-IgG陰性血清

    6.

    CSFV-IgG陽性對照血清(紅蓋)

    1.5ml×1瓶

    主要成份為CSFV-IgG陽血清

    7.

    顯色劑A(紫蓋)

    12ml×1瓶

    主要成份為過氧化脲

    8.

    顯色劑B(黃蓋)

    12ml×1瓶

    主要成份為TMB

    9.

    終止液(藍(lán)蓋)

    12ml×1瓶

    主要成份為H2SO4

    10.

    蓋板膜

    6張

     

    11.

    說明書

    1份

     

    不同批號的試劑組份不可混用。

    儲存條件及有效期

    于2℃~8℃避光保存,防止冷凍,有效期6個(gè)月。

    適用儀器

    1.酶標(biāo)儀,單波長450nm測量或雙波長450/630nm測量。

    2.ELISA用洗板機(jī)。

    3.微量移液器。

    4.水浴箱或恒溫箱。

    5.微量振蕩器。

    樣本要求

    1.本試劑檢測的樣本為豬血清,樣本應(yīng)無菌采集,2℃~8℃貯存不超過一周,長期應(yīng)在-20℃以下保存。

    2.避免使用嚴(yán)重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長菌的樣本。

    3.樣本中含有常規(guī)用量的EDTA、枸櫞酸鈉或肝素鈉等抗凝劑不影響本實(shí)驗(yàn)。

    檢驗(yàn)方法

    1.加樣:根據(jù)樣本數(shù)量,取所需板條。單波長檢測時(shí),需設(shè)空白對照1孔(不加任何液體);雙波長檢測時(shí),不設(shè)空白對照孔。設(shè)陰、陽性對照各2孔,分別加入不稀釋的陰、陽性對照血清100μl于相應(yīng)孔中。其余為樣本孔,每孔加100μl樣本稀釋液,再分別加入樣本10μl(加入樣本后顏色會有變化)。

    2.溫育:加好樣后振蕩10秒,充分混勻,置37℃溫育30分鐘。

    3.洗板:甩去孔內(nèi)液體,用洗滌液(濃縮洗滌液用去離子水以20倍稀釋)注滿反應(yīng)板孔,洗滌5次,每次停留1分鐘,后一次洗后拍干。

    4.加酶:每孔加酶標(biāo)記物100μl,注意:空白孔不加酶標(biāo)記物,也不加其他任何液體。

    5.溫育:置37℃溫育30分鐘。

    6.洗板:同上洗滌。

    7.顯色:每孔加顯色劑A、B各50μl,振蕩混勻,37℃避光反應(yīng)15分鐘。

    8.終止:每孔加終止液50μl,振蕩10秒,充分混勻。終止后5~30分鐘內(nèi)讀數(shù)。

    9.讀數(shù):單波長檢測時(shí),酶標(biāo)儀檢測波長為450nm,以空白孔調(diào)零,讀取各孔吸光度值(A值);雙波長檢測時(shí),以450nm為主波長、630nm為參比波長,讀取各孔吸光度值(A值)。注意:單波長檢測時(shí),若酶標(biāo)儀讀數(shù)前沒有以空白孔調(diào)零,則所得的結(jié)果均應(yīng)減去空白孔A值再做計(jì)算和判定。

    10.結(jié)果判定:

    臨界值(CO.= 0.15。

    樣本A值(S)/臨界值(CO.≥1,判定為CSFV-IgG陽性; S/CO.1,判定為CSFV-IgG陰性。

    陰性對照血清A值應(yīng)小于0.10,陽性對照血清A值應(yīng)大于0.70,否則試驗(yàn)不成立,需重新試驗(yàn)。注意:單波長檢測時(shí),若酶標(biāo)儀讀數(shù)前沒有以空白孔調(diào)零,則陰陽性對照血清A值均應(yīng)減去空白孔A值再做判定

    參考值(參考范圍)

    未感染也未免疫豬瘟疫苗的健康豬群為陰性,S/CO.1。仔豬因其體內(nèi)含有有母源抗體,其測定A值常大于臨界值。

    檢驗(yàn)結(jié)果的解釋

    1.嚴(yán)重溶血、血清中纖維蛋白分離不充分、含紅血球、有沉淀物、長菌的樣本可能導(dǎo)致假陽性。

    2.因個(gè)體差異或免疫時(shí)間長短等因素可能會出現(xiàn)個(gè)別豬只免疫疫苗后檢測結(jié)果為陰性。

    3.陽性結(jié)果用于感染豬的血清學(xué)診斷以及流行病學(xué)調(diào)查時(shí)需結(jié)合其他方法和臨床資料進(jìn)行。

    檢驗(yàn)方法的局限性

    CSFV-IgG可作為評價(jià)豬瘟疫苗免疫效果以及豬瘟病毒感染的血清學(xué)診斷指標(biāo),但不能區(qū)別二者,若想確認(rèn)是疫苗還是野毒感染產(chǎn)生的抗體需結(jié)合臨床資料、免疫程序及其他診斷方法進(jìn)行。

    產(chǎn)品性能指標(biāo)

    1.特異性    以本品檢測30份陰性參比血清不出假陽性。

    2.敏感性    以本品檢測30份陽性參比血清不出現(xiàn)陰性。

    3.精密性    用精密性參比品測定,CV(%)不高于15%(n=10)。

    4.穩(wěn)定性    試劑盒在2℃~8℃放置6個(gè)月或37℃放置3天,檢定結(jié)果達(dá)到以上1-3標(biāo)準(zhǔn)。

    注意事項(xiàng)

    1.本試劑盒僅用于體外診斷。

    2.本試劑盒應(yīng)按含有傳染性材料對待,操作時(shí)需戴手套穿工作衣。

    3.實(shí)驗(yàn)廢棄物應(yīng)經(jīng)121高壓蒸汽滅菌30分鐘,或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。

    4.微孔板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)在室溫中平衡至潮氣干盡后方可拆開,未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔袋并密封4℃保存。未用完的液體試劑應(yīng)蓋好瓶蓋,與其它配套組份放入試劑盒中于2℃-8℃避光保存。

    5.若20倍濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶,屬正常現(xiàn)象,放置37℃至溶解后即可。

    6.應(yīng)用微量移液器加入本及試劑,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性。

    7.加洗滌液時(shí)應(yīng)做到滿而不溢,防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。

    8.終止液有腐蝕性,若濺到皮膚或衣物上應(yīng)立即用大量清水沖洗干凈。

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