ROS活性氧檢測利用熒光探針DCFH-DA進行活性氧的檢測。DCFH-DA本身沒有熒光,可以自由穿過細胞膜,進入細胞內(nèi)后,可以被細胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細胞膜,從而使探針很容易被裝載到細胞內(nèi)。細胞內(nèi)的活性氧可以氧化無熒光的DCFH生成有熒光的DCF,檢測DCF的熒光就可以知道細胞內(nèi)活性氧的水平。
ROS活性氧檢測的具體方法:
1、 抗體:事先咨詢,明確抗體種屬以及是否有該抗體可使用,如有一抗使用費300元每指標(biāo),如無可由雙方協(xié)商而定,客戶自己購買提供或我公司代購;
2、 標(biāo)本收集與保存:
組織樣品 新鮮組織放入液氮或-70度保存,組織不少于100mg(約綠豆大?。?;
培養(yǎng)細胞 通過細胞計數(shù)取不少于2000000個細胞于EP管,加入0.5ml生理鹽水或蛋白保護劑,混勻后保存于冰箱(-70℃,避免反復(fù)凍融);
血液細胞標(biāo)本 以抗凝管保存血樣或以淋巴細胞分離液分離細胞后加入0.5ml生理鹽水或蛋白保護劑,保存(-70℃可長期保存,避免反復(fù)凍融)
血清或細胞培養(yǎng)液標(biāo)本 離心去掉雜質(zhì)后取上清入EP管,保存(以上4℃可保存15-20天,-70℃可長期保存,避免反復(fù)凍融)
3 、 樣本運輸:可選以下的一種方式寄送標(biāo)本
組織樣本、細胞樣本以干冰運輸或加入蛋白保護劑后加冰袋運輸;
細胞樣本也可以直接快件寄送培養(yǎng)瓶(密封不污染,培養(yǎng)液不漏出,細胞不要長得太滿,50%左右,灌滿培養(yǎng)液);
血清或上清液直接加冰袋寄送(密封液體不漏出,視路途遠近2-3天可到達)。