微量法

注意：正式測定之前選擇 2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義

*磷是土壤中可被植物吸收的磷組分，包括全部水溶性磷、部分吸附態(tài)磷及有機態(tài)磷，土壤中*磷是限制植物生長主要因子之一。

測定原理

用雙酸法提取酸溶性磷和吸附態(tài)磷，用鉬銻抗比色法測定。

自備實驗用品及儀器

天平、常溫離心機、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、震蕩儀。

試劑組成和配制

提取液：液體 105mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：粉劑×1 支，4℃避光保存。臨用前加 0.2mL 蒸餾水溶解。試劑二：液體 0.4mL×1 支，4℃保存。

工作液：臨用前將試劑一和試劑混合，加 19.4mL 蒸餾水混勻。

樣本處理

新鮮土樣風(fēng)干，過20目篩，按照土壤質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5的比例（建議稱取約0.2g土樣，加入1mL提取液），振蕩提取 1h，10000g ，25℃離心10min，取上清液待測。

測定操作表

	空白管	測定管
樣本（μL）		20
提取液（μL）	20
工作液（μL）	180	180
充分混勻，25℃靜置 30min
于微量石英比色皿/96 孔板，蒸餾水調(diào)零，測定 700nm 處吸光值 A，分別記為 A 空白管和 A 測定管，△A=A 測定管-A 空白管

注意：空白管只需測定一次。

計算公式

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下 標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.2585x-0.3007，R2=0.9903

*磷含量（mg/kg）=（△A+0.3007）÷ 0.2585×V 反總÷（W×V 樣÷V 樣總）

= 38.68×（△A+0.3007）÷W

V 反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V 樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.02mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質(zhì)量，g

b. 用 96 孔板測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.1293x-0.3007，R2=0.9903

*磷含量（mg/kg）=（△A+0.3007）÷ 0.1293×V 反總÷（W×V 樣÷V 樣總）

= 77.36×（△A+0.3007）÷W

V 反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V 樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.02mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質(zhì)量，g

注意事項

1. 配好的試劑 3 天內(nèi)使用完。

2. 低檢出限為 1.16mg/g。