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    GoldStar Best DNA Polymerase說明書
    更新時間:2021-10-19 點(diǎn)擊量:1040

    GoldStar Best DNA Polymerase說明書

                                                                    

    (5×GoldStar Best PCR Buffer With Mg  )2+

    目錄號:K0654

     

    保存條件:-20℃保存。

     

    組分說明

     

      Cat. No.                                 K0654      K0654A      K0654C

      Kit Size                                  250 U        500 U       6×500 U

      GoldStar Best DNA Polymerase, 5 U/μl       50 μl       100 μl      6×100 μl

      5×GoldStar Best PCR Buffer                 1 ml       2×1 ml        3×5 ml

                 注意:本產(chǎn)品的5×GoldStar Best PCR  Buffer中含有7.5mM鎂離子。

     

    產(chǎn)品簡介

     

      該產(chǎn)品是經(jīng)過特殊處理的熱啟動高保真聚合酶。該聚合酶具有  5-3DNA聚合酶活

    性,5-3′核酸外切酶活性和3-5′核酸外切酶活性,在普通PCR條件下,與GoldStar Taq

    DNA Polymerase相比,具有擴(kuò)增效率高、錯配率低的優(yōu)良性能。化學(xué)修飾使該酶在常

    溫下沒有聚合酶活性,有效避免在常溫條件下由引物和模板非特異性結(jié)合或引物二聚

    體而產(chǎn)生的非特異性擴(kuò)增,酶的激活須在 95℃下孵育10分鐘,該條件可以整合入已有

    PCR熱循環(huán)程序。優(yōu)化的緩沖體系使酶的作用發(fā)揮最大功效,實(shí)現(xiàn)對目的片段的高

    保真、高特異性、高擴(kuò)增效率、高靈敏度擴(kuò)增。使用本制品擴(kuò)增得到的   PCR產(chǎn)物的3

    端附有一個A"堿基,因此可直接用于T/A克隆。本產(chǎn)品應(yīng)用于常規(guī)的PCR、RT-PCR

    多重PCR,特別適用于對特異性、保真性和擴(kuò)增效率均有較高要求的PCR。

     

    活性定義

     

      用活性化的大馬哈魚精ziDNA作為模板/引物,在74℃,30分鐘內(nèi),將10   nmol

    氧核苷酸摻入到酸性不溶物質(zhì)所需的酶量定義為1個活性單位(U)。

    質(zhì)量控制

     

      經(jīng)過多次柱純化, SDS-PAGE檢測其純度大于99%;經(jīng)檢測無外源核酸酶活性;

    PCR方法檢測無宿主殘余DNA;能有效地擴(kuò)增人基因組中的單拷貝基因;室溫存放一

    個月,無明顯活性改變。

     

                    本產(chǎn)品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途

     

    使用方法

     

        以下舉例為常規(guī)PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)條件,實(shí)際操作中應(yīng)根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的

        片段大小不同進(jìn)行相應(yīng)的改進(jìn)和優(yōu)化。

     

        1. PCR反應(yīng)體系

     

    試劑                                     50 μl反應(yīng)體系        終濃度

    5×GoldStar Best Taq PCR Buffer                10 μl                1×

    dNTP Mix2.5 mM each                       4 μl            200 μM each

    Forward Primer,10 μM                      2 μl            0.4 μM

    Reverse Primer10 μM                       2 μl            0.4 μM

    Template DNA                                <1 μg         <1 μg/reaction

    GoldStar Best Taq DNA Polymerase,5 U/μl      0.5 μl

    RNase-Free Water                             up to 50 μl

     

           注意:1)引物濃度請以終濃度0.1-1.0 μM作為設(shè)定范圍的參考。擴(kuò)增效率不高的情況下,可提高引物的濃度;發(fā)生非特異性反應(yīng)時,可降低引物濃度,由此優(yōu)化反應(yīng)體系。

           2)鎂離子濃度請以終濃度1.5-3 mM作為設(shè)定范圍的參考。本產(chǎn)品的5×GoldStar Best Taq PCR Buffer中已含有7.5 mM鎂離子,可根據(jù)不同引物對和模板調(diào)節(jié)鎂離子濃度,由此優(yōu)化反應(yīng)體系。

     

        2. PCR反應(yīng)條件

     

    步驟                 溫度              時間

    預(yù)變性               95℃             10 min

    變性                 94℃             30 s

    退火                55-65℃           30 s     30-40個循環(huán)

    延伸                 72℃             60 s

    終延伸               72℃             5 min

     

           注意:1)一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引物的熔解溫度Tm5℃,無法得到理想的擴(kuò)增效率時,適當(dāng)降低退火溫度;發(fā)生非特異性反應(yīng)時,提高退火溫度,由此優(yōu)化反應(yīng)條件。

           2)延伸時間應(yīng)根據(jù)所擴(kuò)增片段大小設(shè)定,本產(chǎn)品中所包含的GoldStar Best DNA Polymerase的擴(kuò)增效率為1 kb/min。

           3)可根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的下游應(yīng)用設(shè)定循環(huán)數(shù)。如果循環(huán)次數(shù)太少,擴(kuò)增量不足;如果循環(huán)次數(shù)太多,錯配機(jī)率會增加,非特異性背景嚴(yán)重。所以在保證產(chǎn)物得率的前提下應(yīng)盡量減少循環(huán)次數(shù)。

           4)本產(chǎn)品須在預(yù)變性95℃,10 min條件下實(shí)現(xiàn)酶的活化。

     

        3.結(jié)果檢測:反應(yīng)結(jié)束后取5  µl反應(yīng)產(chǎn)物,加入適量上樣緩沖液后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測。

    實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):


    滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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