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021-65232515
MM.1S 人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞
MM.1S human multiple myeloma cells ,MM.1S
貨號(hào):YJ-h291(STR鑒定)
價(jià)格: 1800.0
規(guī)格: 1*106
細(xì)胞描述
該細(xì)胞系的母細(xì)胞株MM.1是從一位對(duì)類固醇療法產(chǎn)生抗藥性的多發(fā)性骨髓瘤患者的外周血中建立的。MM.1R對(duì)地塞米松耐藥。近緣細(xì)胞系MM.1S也是從MM.1中分離出來的,但對(duì)地塞米松敏感。該細(xì)胞復(fù)蘇后需要兩周左右才能恢復(fù)正常生長。
細(xì)胞特性
1) 來源:人、女性、外周血
2) 形態(tài):成淋巴瘤細(xì)胞,懸浮和輕微的貼壁
3) 含量:>1x10^6
4) 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性
5) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
6)用途:僅供科研使用。
運(yùn)輸和保存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
細(xì)胞接收后的處理
1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2)請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)懸浮細(xì)胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞在1000RPM條件下離心5min,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基)。
4)半貼細(xì)胞(或貼壁不牢細(xì)胞):T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的情況,若細(xì)胞密度在70%以下,客戶需收集T25瓶中的懸浮的細(xì)胞離心后用完全培養(yǎng)基重懸后打回到原來的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng),若細(xì)胞生長到70%-90%可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代,在傳代過程中,需要收集T25瓶中懸浮的細(xì)胞離心后回收。
5)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備1640(推薦:YJ-0002)基礎(chǔ)培養(yǎng)基, 優(yōu)質(zhì)胎牛血清10 %,P/S青霉素-鏈霉素 1%
2) 注意事項(xiàng):
a.該細(xì)胞同時(shí)存在懸浮生長和輕微的貼壁狀態(tài)。
b.該細(xì)胞復(fù)蘇后需培養(yǎng)2周左右時(shí)間,才能恢復(fù)正常生長狀態(tài)。
c.細(xì)胞密度不可過高,在細(xì)胞匯合前進(jìn)行傳代,否則容易成團(tuán)。
3) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
參考傳代比例: 1:3-1:6,參考換液頻率: 2-3天
4) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二. 細(xì)胞處理:
復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度和拍照。
2 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)70%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
該細(xì)胞為懸浮和輕微的貼壁細(xì)胞,傳代可以參考以下方法:
1) 懸浮狀態(tài)下生長的細(xì)胞,可以通過向培養(yǎng)瓶中添加完全培養(yǎng)基來維持細(xì)胞的生長狀態(tài),一般情況下細(xì)胞密度維持在1×105~1×10^6個(gè)/mL(不同細(xì)胞對(duì)密度要求不同,具體可以參考細(xì)胞說明書)可以維持細(xì)胞的正常生長。懸浮細(xì)胞的收集:將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細(xì)胞收集到離心管中。棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2).貼壁細(xì)胞的的消化,pbs清洗1-2次 由于細(xì)胞貼壁不牢,pbs清洗過程中會(huì)有細(xì)胞脫落,所以pbs清洗液需要收集到離心管中。清洗后的貼壁細(xì)胞按正常的貼壁細(xì)胞處理。加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%血清的培養(yǎng)基來終止消化。
3)將收集到的懸浮細(xì)胞,消化下貼壁細(xì)胞和pbs清洗液中的細(xì)胞以1000rpm,5min離心重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3 細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。
下面T25瓶為例;
1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入3-4ml含10%血清的完全培養(yǎng)基來終止消化,收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml。
2.1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3.將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
注意事項(xiàng)
1.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)(視細(xì)胞密度而定)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。
3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?,故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時(shí)間證明,期間間隔時(shí)間不能大于7天。
4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤色十余年,是您值得信賴的科研合作伙伴!
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